在分析化學領域,液相色譜是應用最為廣泛的一種分離方法。其原理是將樣品溶液與固定于填充床上的流動相進行相對運動,在移動床中各組分的分配比由流動相的種類和流速決定,從而實現(xiàn)混合物中各種組分的高效分離。一般選擇液相色譜柱的原則是,分析大分子量化合物選擇大孔徑色譜柱;對于高pH值或者堿性化合物需要選擇高封端或者特殊封端的色譜柱,以改善峰形,延長色譜柱使用壽命等。
01
色譜方法的分類
液相色譜分離方法大致可以分為正相色譜、反相色譜、離子交換色譜、疏水作用色譜、體積排除色譜、親和色譜以及手性色譜。在高效液相色譜法中,目前應用得最廣泛的是正相色譜和反相色譜,其中反相色譜又是重中之中。
02
色譜分離基本原理
正相色譜的分離原理
根據(jù)溶質(zhì)極性的不同而產(chǎn)生的溶質(zhì)在吸附劑上吸附性強弱的差異而分離。
反相色譜的分離原理
根據(jù)因溶質(zhì)疏水性的不同而產(chǎn)生的溶質(zhì)在流動相與固定相之間分配系數(shù)的差異而分離。
范德姆特方程
范德姆特方程(Van Deemter equation)在色譜學中是綜合考慮了分離過程中引起峰展寬的物理因素、動力學因素和熱力學因素后得到的單位柱長的總峰展寬與流動相流速的關系式。
03
液相色譜柱的結(jié)構(gòu)
液相色譜柱由柱管、壓帽、卡套(密封環(huán))、篩板(濾片)、接頭、螺絲(封頭)與柱填料等組成。
柱管
多用不銹鋼制成,如果使用時柱壓不高于70kg/cm2時,也可采用厚壁玻璃或石英管,管內(nèi)壁要求有很高的光潔度。用于柱填料的裝填。空柱各組件均為不銹鋼材質(zhì),能耐受一般的溶劑作用。但由于含氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性,故使用時要注意,柱及連接管內(nèi)不能長時間存留此類溶劑,以避免腐蝕。
壓帽
即色譜柱兩端套合于柱管端外壁的塑性圓柱帽,中部有小孔,多為聚四氟乙烯制成,用于固定篩板。
密封環(huán)
位于接頭螺旋環(huán)內(nèi)壁的彈性環(huán),多為聚四氟乙烯制成,用于色譜柱兩端壓帽與柱外壁的密封。
04
液相色譜柱規(guī)格
色譜柱按用途可分為分析型和制備型兩類
1
常規(guī)分析柱(常量柱),內(nèi)徑2~5mm,柱長10~30cm
2
窄徑柱(narrowbore),內(nèi)徑1~2mm,柱長10~20cm
3
毛細管柱(又稱微柱microcolumn),內(nèi)徑0.2~0.5mm
4
半制備柱,內(nèi)徑>5mm
5
實驗室制備柱,內(nèi)徑20~40mm,柱長10~30cm
6
生產(chǎn)制備柱內(nèi)徑可達幾十厘米
05
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· 填料鍵合二元醇基提高了填料表面的親水性,可以利用HILIC模式進行分離
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· VN-50 1D采用外部為SUS,內(nèi)部[和液體接觸部分]為PEEK的二重結(jié)構(gòu)柱管。彌補了PEEK柱管物理強度弱的缺點,可以在高壓條件下使用。
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隨著實驗室建設的蓬勃發(fā)展,液相色譜柱在現(xiàn)代高效液相色譜分析中應用的越來越廣泛,色譜柱的選擇直接影響了分離效果的好壞,選擇合適的色譜柱可以縮短方法開發(fā)所需的時間,并且使方法更具穩(wěn)定性。如何將液相色譜柱的應用融入到實驗室建設中也成為了當下行業(yè)內(nèi)備受矚目的熱點問題。“世界制藥原料中國展”暨“世界制藥機械、包裝設備與材料中國展”(CPHI & PMEC China)在實驗室領域的延伸——實驗室儀器與裝備展區(qū)將通過展示各類創(chuàng)新設備及應用方案,為行業(yè)呈現(xiàn)了前沿領域在實驗室建設過程中的應用及解決方案。
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