2023年05月10日，上海醫(yī)藥行業(yè)協(xié)會(huì)官宣發(fā)布了由上海醫(yī)藥行業(yè)協(xié)會(huì)組織起草的《免疫細(xì)胞治療產(chǎn)品生產(chǎn)用質(zhì)粒生產(chǎn)質(zhì)量管理指南》（T/SHPPA 019—2023）團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)，該標(biāo)準(zhǔn)于2023年06月01日起實(shí)施，此團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)從機(jī)構(gòu)與人員、廠房與設(shè)備、生產(chǎn)管理、物料管理、細(xì)菌種子批、工藝控制、質(zhì)量控制、包裝與貯存、運(yùn)輸?shù)确矫孢M(jìn)行了明確和要求，生產(chǎn)企業(yè)可按照本指南的要求，規(guī)范質(zhì)粒的生產(chǎn)質(zhì)量管理，進(jìn)一步確保產(chǎn)品質(zhì)量，本文梳理了免疫細(xì)胞治療產(chǎn)品生產(chǎn)用質(zhì)粒GMP管理的主要關(guān)注點(diǎn)。
一、免疫細(xì)胞治療產(chǎn)品
運(yùn)載工具——質(zhì)粒
1、定義
質(zhì)粒（plasmid），系細(xì)菌等生物中染色體以外的環(huán)狀DNA元件，具有自主復(fù)制能力，使其在子代細(xì)胞中能保持恒定的拷貝數(shù)，并表達(dá)所攜帶的遺傳信息。大腸桿菌中的質(zhì)粒示例圖如下：
大腸桿菌中的質(zhì)粒（4a.njau.edu.cn:8020/bio/2/3-1-1.htm）
2、運(yùn)載工具——質(zhì)粒工作原理
質(zhì)粒作為體外基因修飾系統(tǒng)的生產(chǎn)用起始關(guān)鍵物料，被用于將目的基因轉(zhuǎn)染到基因修飾載體中（如慢病毒載體），進(jìn)一步生產(chǎn)免疫細(xì)胞治療產(chǎn)品，為了把外源基因裝到質(zhì)粒上，科學(xué)家們先用限制性?xún)?nèi)切酶把質(zhì)粒的環(huán)切開(kāi)，然后把外源基因接到環(huán)上。外源基因這種特殊"貨物"被裝上"車(chē)"后，再被送入大腸桿菌體內(nèi)。如果在外源基因前面加上一段特殊DNA序列作為翻譯蛋白質(zhì)的啟動(dòng)裝置，細(xì)菌就會(huì)把外源基因翻譯成人們所需要的蛋白質(zhì)?？磥?lái)，借助質(zhì)粒進(jìn)行的基因運(yùn)載過(guò)程是成功的，外源基因不僅可以到達(dá)目的地，而且還保持正常功能。
把目的基因插入質(zhì)粒的過(guò)程（http://www.med66.com）
二、《免疫細(xì)胞治療產(chǎn)品生產(chǎn)用質(zhì)粒生產(chǎn)質(zhì)量管理指南》標(biāo)準(zhǔn)信息
三、《免疫細(xì)胞治療產(chǎn)品生產(chǎn)用質(zhì)粒生產(chǎn)質(zhì)量管理指南》起草單位、起草人和主要技術(shù)內(nèi)容
四、生產(chǎn)用質(zhì)粒GMP管理有哪些值得關(guān)注？
質(zhì)粒通常不直接作用于免疫細(xì)胞治療產(chǎn)品，其生產(chǎn)、檢驗(yàn)和放行管理應(yīng)參考《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》及其相關(guān)附錄的要求，應(yīng)根據(jù)其使用于不同的研發(fā)階段、不同的基因修飾載體及免疫細(xì)胞治療產(chǎn)品及其不同的生產(chǎn)工藝需求，企業(yè)可以根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的結(jié)果確定生產(chǎn)過(guò)程中適用GMP要求的符合程度，全文詳見(jiàn)www.ttbz.org.cn。
1、質(zhì)粒的生產(chǎn)
質(zhì)粒生產(chǎn)應(yīng)依照已批準(zhǔn)的工藝規(guī)程和操作規(guī)程進(jìn)行操作并有相關(guān)記錄，確保生產(chǎn)過(guò)程的有效控制，持續(xù)、穩(wěn)定地生產(chǎn)出符合質(zhì)量要求的產(chǎn)品。應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注生產(chǎn)用原材料的質(zhì)量控制、批間差異、雜質(zhì)水平、工藝中間控制、污染控制等可能影響免疫細(xì)胞治療產(chǎn)品安全性、有效性的因素；如質(zhì)粒生產(chǎn)應(yīng)在受控環(huán)境中進(jìn)行，環(huán)境需采取有效控制措施并進(jìn)行日常監(jiān)測(cè)，以盡可能降低環(huán)境微生物及顆粒等對(duì)產(chǎn)品可能造成的污染，操作環(huán)境的潔凈度級(jí)別以無(wú)菌質(zhì)粒產(chǎn)品生產(chǎn)操作為例，宜按照下表中的示例進(jìn)行選擇：
2、質(zhì)粒的質(zhì)量控制
1) 應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注安全性和轉(zhuǎn)染有效性相關(guān)項(xiàng)目，如超螺旋比例、宿主DNA殘留、宿主RNA殘留、宿主蛋白殘留等。
2) 對(duì)質(zhì)粒逐批進(jìn)行檢驗(yàn)。一般包括以下項(xiàng)目：理化(外觀、pH)、質(zhì)粒濃度或含量、鑒別(限制性?xún)?nèi)切酶分析、序列鑒定)、純度與雜質(zhì)(Aaso/Azs、超螺旋比例、宿主菌DNA殘留、宿主菌RNA殘留、宿主蛋白殘留、抗生素殘留(如適用)等)、無(wú)菌及細(xì)菌內(nèi)毒素等。
3) 應(yīng)根據(jù)質(zhì)粒在最終的免疫細(xì)胞治療產(chǎn)品生產(chǎn)中的功能及安全性等相關(guān)因素，經(jīng)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估建立合理的質(zhì)粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；可參照《中國(guó)藥典》的相關(guān)要求，進(jìn)行檢測(cè)方法的驗(yàn)證或確認(rèn)。
4) 應(yīng)對(duì)質(zhì)粒的穩(wěn)定性進(jìn)行長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)，選擇合理、敏感的考察項(xiàng)目(如外觀、pH、濃度/含量、純度(Aaeo/As)、超螺旋比例等),并根據(jù)相關(guān)數(shù)據(jù)制定或調(diào)整質(zhì)粒的貯存條件和有效期。
3、質(zhì)粒的質(zhì)量保證
1) 應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注如質(zhì)粒生產(chǎn)或質(zhì)量控制發(fā)生變更，應(yīng)進(jìn)行充分研究和評(píng)估，關(guān)注變更對(duì)質(zhì)粒質(zhì)量的影響，也應(yīng)將對(duì)體外基因修飾系統(tǒng)及免疫細(xì)胞治療產(chǎn)品的影響納入考慮范圍。
2) 應(yīng)當(dāng)制定質(zhì)粒生產(chǎn)工藝規(guī)程并經(jīng)過(guò)批準(zhǔn)，工藝規(guī)程中應(yīng)明確質(zhì)粒產(chǎn)品的關(guān)鍵質(zhì)量屬性(如適用)、生產(chǎn)工藝流程、關(guān)鍵工藝參數(shù)和控制范圍、中間控制項(xiàng)目及控制標(biāo)準(zhǔn)。應(yīng)制定生產(chǎn)操作規(guī)程，對(duì)生產(chǎn)操作步驟等進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，以確保生產(chǎn)過(guò)程的有效運(yùn)行和有效控制。
3) 生產(chǎn)工藝過(guò)程中任何偏離生產(chǎn)工藝規(guī)程的情況均應(yīng)當(dāng)有記錄，應(yīng)對(duì)偏差進(jìn)行評(píng)估、調(diào)查并制定糾正和/或預(yù)防措施，有效防止類(lèi)似偏差的再次發(fā)生。
質(zhì)粒產(chǎn)品的運(yùn)輸和轉(zhuǎn)運(yùn)的方式應(yīng)有明確的操作規(guī)程進(jìn)行規(guī)定，運(yùn)輸?shù)姆绞綉?yīng)進(jìn)行驗(yàn)證和確認(rèn)(如適 用),整個(gè)運(yùn)輸過(guò)程應(yīng)有完整的記錄。
參考文獻(xiàn)
[1] www.ttbz.org.cn等
作者簡(jiǎn)介
滴水司南，男，生物醫(yī)藥高級(jí)工程師，立足于生物醫(yī)藥行業(yè)質(zhì)量管理工作，專(zhuān)注于生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)。
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