抗體是由B細(xì)胞分化成的漿細(xì)胞所產(chǎn)生免疫球蛋白，在免疫系統(tǒng)受到刺激時(shí)，會(huì)與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)。在上上個(gè)世紀(jì)末（1890年），第一次利用血清注射治療疾病的成功，為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)開創(chuàng)了新的道路。后來人們確定其有效成分為抗體，并在1975年利用雜交瘤技術(shù)制備了第一支單克隆抗體。
自從1986年第一個(gè)鼠源性單抗藥物問世，現(xiàn)在全球已有近百種單抗藥物上市。單抗藥物的制備技術(shù)也先后經(jīng)歷了四個(gè)發(fā)展階段：
第一代：鼠源單抗（momab）：雜交瘤單克隆抗體技術(shù)
第二代：人鼠嵌合單抗（ximab）：嵌合抗體和人源化改造單克隆抗體技術(shù)
第三代：人源化單抗（zumab）：全人源單克隆抗體技術(shù)
第四代：全人源化單抗（mumab）：天然全人源化單克隆抗體技術(shù)
第一代鼠源抗體能夠被人體免疫系統(tǒng)識(shí)別，引起人抗鼠抗體反應(yīng)，使得單抗藥物療效減弱，并且引起嚴(yán)重的不良反應(yīng)，因此第一代單抗藥物的臨床應(yīng)用受到極大的限制。而人源化單抗和全人源化單抗能夠克服人抗鼠抗體反應(yīng)，避免單抗分子被免疫系統(tǒng)當(dāng)作異源蛋白而被快速清除，提高單抗藥物的藥效。尤其是全人源化單抗的可變區(qū)和恒定區(qū)都是人源的，能夠去除免疫原性和毒副作用。這些因素使得人源化（和全人源化）單抗藥物具有高親和力、高特異性及毒副作用小的特點(diǎn)，因此成為目前治療性抗體藥物發(fā)展的重點(diǎn)。
接下來，我們將對(duì)單抗藥物的發(fā)展歷程做進(jìn)一步的介紹。
雜交瘤單克隆抗體技術(shù)
雜交瘤技術(shù)是比較成熟的、技術(shù)難度較低的抗體制備技術(shù)，現(xiàn)在大多數(shù)的實(shí)驗(yàn)室還在使用。雜交瘤技術(shù)是將小鼠脾 臟中的B細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合后，得到的雜交細(xì)胞能夠分泌抗體和無限傳代。這一技術(shù)主要有兩次篩選過程，第一次是使用選擇性培養(yǎng)基選出雜交瘤細(xì)胞；第二次就是進(jìn)一步選出能產(chǎn)生我們需要的抗原特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。
雜交瘤技術(shù)制備的鼠單抗可以引起人體明顯的副作用，比如鼠單抗的FC不能引起人體免疫反應(yīng)，產(chǎn)生抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)或補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒作用，并且鼠抗體會(huì)被人體免疫系統(tǒng)識(shí)別為異源蛋白，被快速清除，影響藥效。
嵌合抗體和人源化改造單克隆抗體技術(shù)
嵌合抗體用人源的抗體產(chǎn)生基因的恒定區(qū)序列來代替小鼠相應(yīng)的抗體基因的恒定區(qū)序列，大大的降低了鼠源抗體產(chǎn)生的免疫原性反應(yīng)，使抗體的70%成分都是人成分，然后插入載體，轉(zhuǎn)染細(xì)胞生產(chǎn)抗體。雖然抗體可變區(qū)的抗原識(shí)別序列僅占嵌合單克隆抗體非常少的一部分，但鼠源性基因仍然是存在的。
人源化抗體改造是將鼠源單抗可變區(qū)中6個(gè)CDR與人的相對(duì)保守的可變區(qū)框架區(qū)（FR）結(jié)合，基因重組之后表達(dá)出蛋白。人源化程度可達(dá)95%，但是大多數(shù)的抗體經(jīng)過人源化改造后，親和力和特異性都會(huì)降低，并且具有較強(qiáng)的免疫原性。
全人源單克隆抗體技術(shù)
全人源抗體，是指組成抗體的氨基酸序列全部來自人類。現(xiàn)在已經(jīng)有四種技術(shù)可以用于全人源抗體制備。
第一種噬菌體展示技術(shù)，是目前發(fā)展較為成熟的單抗藥物制備技術(shù)，是將抗體基因序列插入到噬菌體外殼蛋白的結(jié)構(gòu)基因中，使抗體基因與外殼蛋白一起表達(dá)。噬菌體展示技術(shù)僅需獲得相應(yīng)抗體片段的基因序列，就可快速篩選單抗，可以避免避免雜交瘤技術(shù)的限制性?？贵w人源成分，降低免疫原性。
第二種酵母展示技術(shù)，屬于真核表達(dá)系統(tǒng)，可以提高抗體折疊的正確性及表達(dá)后修飾的三維結(jié)構(gòu)，進(jìn)而提高細(xì)胞表面蛋白結(jié)合的親和力和穩(wěn)定性。并且與噬菌體相比，酵母細(xì)胞更大，利于流式細(xì)胞技術(shù)和熒光激活細(xì)胞的分選。
第三種轉(zhuǎn)基因動(dòng)物全人源化抗體，是將人類抗體重鏈和輕鏈基因轉(zhuǎn)入抗體基因缺陷的小鼠，再用抗原免疫小鼠就可獲得全人源抗體。該技術(shù)避免了對(duì)每種抗體的單一人源化改造，使抗體制備成本減少，開發(fā)周期縮短。當(dāng)然，這種技術(shù)產(chǎn)生的抗體是在小鼠體內(nèi)成熟的，沒有經(jīng)過人體環(huán)境的免疫選擇，從本質(zhì)上來說屬于“鼠源化”人單抗，存在一定的安全隱患。
第四種，單個(gè)B細(xì)胞抗體制備技術(shù)，主要是EBV轉(zhuǎn)化B細(xì)胞技術(shù)，是利用EB病毒在體外能感染正常的B細(xì)胞，使之變成無限傳代的淋巴細(xì)胞系的原理，制備分泌人單抗的雜交瘤細(xì)胞。一般有三個(gè)步驟：鑒定和分離單個(gè)B細(xì)胞、擴(kuò)增和克隆抗體基因及表達(dá)、篩選和鑒定抗原特異性抗體。該技術(shù)保留了輕重鏈可變區(qū)的天然配對(duì)，具有基因多樣性好、效率高、所需細(xì)胞量少等優(yōu)勢(shì)，因此更多用來制備天然全人源單克隆抗體藥物。
天然全人源單克隆抗體技術(shù)
是指抗體來自于天然的人體B細(xì)胞，涉及到的技術(shù)包括人骨髓瘤細(xì)胞技術(shù)、B細(xì)胞永生化技術(shù)（EBV轉(zhuǎn)化B細(xì)胞克隆及其他細(xì)胞因子輔助B細(xì)胞克隆）、單個(gè)B細(xì)胞RT-PCR及單個(gè)B細(xì)胞測序等技術(shù)。這些技術(shù)的核心就是獲得可無限傳代的人體B細(xì)胞，以單個(gè)B細(xì)胞表達(dá)目的單克隆抗體。
目前，單克隆抗體藥物已經(jīng)成為生物醫(yī)藥的重要領(lǐng)域，成功用于腫瘤、自身免疫性疾病、感染性疾病和移植排斥反應(yīng)等多種疾病的治療。當(dāng)然，在本文中僅是介紹抗體藥物的研發(fā)階段的研究進(jìn)展，而在抗體藥的能夠成功上市的整個(gè)過程中，僅僅是邁出了第一步，后續(xù)的生產(chǎn)工藝才是重中之重。
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