近年來，mRNA-LNP技術與免疫細胞治療、基因編輯等領域的快速進展，為未攻克疾病治療開辟了新途徑。多款基于這些技術的藥物成功上市，展現(xiàn)了其巨大潛力，mRNA-LNP技術如同一顆冉冉升起的新星，迅速進入公眾視野，尤其是在COVID-19疫苗的研發(fā)中展現(xiàn)了其獨特的優(yōu)勢。然而，國內在mRNA-LNP免疫治療產品的標準化方面尚存空白，為響應國家政策推動產業(yè)發(fā)展，亟需制定相關標準。值得一提的是，隨著行業(yè)標準的日益完善，由中國食品藥品企業(yè)質量安全促進會主導制定的《基于mRNA-LNP技術的（細胞）免疫治療產品開發(fā)指南》（T/FDSA 0055-2024）將于2024年10月03日正式實施。這一規(guī)范基于mRNA-LNP技術開發(fā)（細胞）免疫治療產品的技術路線、制備工藝、檢驗方法、質控要點、功能驗證等方面的內容，以及研發(fā)生產所需的管理、組織、人員、設施設備及物料等相關要求。為科研機構、生產企業(yè)提供了明確的技術指導和產品規(guī)范，特別是在不同技術路線的產品設計、質控指標等方面，標準提出了具體要求，旨在推動mRNA-LNP技術的持續(xù)優(yōu)化與創(chuàng)新。
一、你了解mRNA-LNP究竟是什么嗎？
mRNA-LNP（信使核糖核酸-脂質納米顆粒）是一種組合體，其中mRNA（信使核糖核酸）是一種指導人體細胞產生特定蛋白質的生物分子，而LNP（脂質納米顆粒）則是一種基于脂質成分的納米遞送載體。mRNA-LNP技術則是利用這種組合體進行藥物遞送或疫苗接種的一種技術。具體來說，LNP作為遞送載體，通過靜電絡合的方式與帶負電荷的mRNA分子結合，形成穩(wěn)定的復合體。當mRNA-LNP到達細胞膜時，其與帶負電荷的細胞膜觸發(fā)膜融合，促進mRNA分子的遞送進入細胞內。進入細胞后，LNP的雙層結構在溶酶體的酸性環(huán)境下遭受破壞，釋放mRNA，mRNA隨后與核糖體結合，指導細胞產生特定的蛋白質，如抗體或其他治療性蛋白。
二、基于mRNA-LNP技術的（細胞）免疫治療產品開發(fā)指南主要技術參數(shù)要求
作為國內首 個基于mRNA-LNP技術的（細胞）免疫治療產品開發(fā)的通用標準，《基于mRNA-LNP技術的（細胞）免疫治療產品開發(fā)指南》的發(fā)布填補了行業(yè)空白，提供了清晰、可操作的規(guī)范與指南，對突破當前制約行業(yè)發(fā)展的關鍵技術瓶頸、搶占新一輪科技革命和產業(yè)革命制高點、推動行業(yè)向高質量發(fā)展方向邁進具有重大而深遠的意義。如標準中mRNA-LNP成品質量控制指標匯總表詳盡列出了從鑒別、含量、理化特性到生物學活性及安全性的多項檢測指標。鑒別通過DNA測序確認mRNA序列準確性；含量檢測涵蓋mRNA含量、包封率及遞送系統(tǒng)組分，方法多樣靈活。理化特性檢查包括粒徑、PDI、Zeta電位等，確保產品穩(wěn)定性與均勻性。生物學活性通過ELISA等方法評估蛋白翻譯功能。安全性方面，強調無菌、細菌內毒素及異常毒性檢測，確保產品安全。純度及工藝相關雜質檢測嚴格，如截短序列RNA、dsRNA殘留等，均遵循藥典指導原則，確保產品質量高標準，詳見下表：
mRNA-LNP成品質量控制指標匯總表
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質量屬性 |
質量控制指標 |
推薦檢測方法 |
參考限值 |
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鑒別 |
mRNA序列 |
《中國藥典》四部DNA測序技術指導原則（9108）；Sanger法 |
關鍵元件與理論序列相符 |
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含量 |
mRNA含量 |
《中國藥典》三部紫外-可見分光光度法（通則0401）；RiboGreen熒光檢測法、熒光PCR法、ddPCR法 |
依據(jù)方案而定 |
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包封率 |
《中國藥典》四部微粒制劑指導原則（9014）；RiboGreen熒光檢測法 |
≥80% |
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遞送系統(tǒng)組分含量 |
《中國藥典》三部高效液相色譜法（通則0512）；HPLC-CAD法 |
依據(jù)方案而定 |
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理化特性 |
平均粒徑 |
動態(tài)光散射法、小角X射線散射 |
依據(jù)方案而定 |
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粒徑 |
動態(tài)光散射法、小角X射線散射 |
依據(jù)方案而定 |
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PDI |
動態(tài)光散射法 |
≤ 0.2 |
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Zeta電位 |
相分析動態(tài)光散射法、電泳光散射法 |
依據(jù)方案而定 |
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pH |
《中國藥典》三部pH值測定法（通則0631） |
依據(jù)方案而定 |
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外觀 |
《中國藥典》三部溶液顏色檢查法（通則0901）、澄清度檢查法（通則0902）、可見異物檢查法（通則0904） |
乳白色懸濁液 |
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滲透壓摩爾濃度 |
《中國藥典》三部滲透壓摩爾濃度測定法（通則0632） |
依據(jù)方案而定 |
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可見異物 |
《中國藥典》四部可見異物檢查法（通則0904） |
符合藥典規(guī)定 |
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不溶性微粒 |
《中國藥典》四部不溶性微粒檢查法（通則0903） |
符合藥典規(guī)定 |
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裝量/裝量差異 |
《中國藥典》四部注射劑（通則0102） |
- |
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《中國藥典》三部最低裝量檢查法（通則0942） |
- |
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水分（劑型：凍干粉） |
《中國藥典》三部水分測定法-費休氏法（通則0832） |
≤3.0% |
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生物學活性 |
蛋白翻譯功能 |
ELISA、FACS、Western Blot |
視翻譯機理 |
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安全性 |
無菌 |
《中國藥典》三部無菌檢測法（通則1101）；ATP生物發(fā)光法、固相細胞計數(shù)、呼吸作用 |
陰性 |
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細菌內毒素 |
《中國藥典》三部細菌內毒素檢查凝膠法：凝膠限度試驗（通則1143） |
≤20EU/ml，或依據(jù)方案而定 |
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《中國藥典》三部細菌內毒素檢查法：光度測定法（通則1143） |
≤20EU/ml，或依據(jù)方案而定 |
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異常毒性 |
《中國藥典》四部異常毒性檢查法（通則1141） |
符合藥典規(guī)定 |
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純度及工藝相關雜質 |
截短序列RNA |
《中國藥典》三部毛細管電泳法（通則0542） |
視具體截斷序列 |
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dsRNA殘留量 |
《中國藥典》三部免疫化學法（通則3429）；ELISA法 |
≤ 0.5 % |
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加帽不完全的mRNA |
《中國藥典》三部高效液相色譜法（通則0512）、四部質譜法（通則0431） |
依據(jù)方案而定 |
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加帽率 |
《中國藥典》四部毛細管電泳法（通則0542） |
>90% |
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《中國藥典》四部質譜法（通則0431） |
- |
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《中國藥典》四部高效液相色譜法（通則0512） |
- |
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去磷酸不完全的mRNA |
《中國藥典》三部高效液相色譜法（通則0512） |
依據(jù)方案而定 |
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修飾過度的mRNA |
《中國藥典》三部高效液相色譜法（通則0512） |
依據(jù)方案而定 |
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乙醇殘留 |
《中國藥典》四部氣相色譜法（通則0521） |
≤0.5% |
三、《基于mRNA-LNP技術的（細胞）免疫治療產品開發(fā)指南》標準信息
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項目 |
內容 |
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標準號 |
T/FDSA 0055—2024 |
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中文名稱 |
《基于mRNA-LNP技術的（細胞）免疫治療產品開發(fā)指南》 |
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英文標題 |
Guidelines for the development of Cell immunotherapy products based on mRNA-LNP technology |
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發(fā)布日期 |
2024年09月03日 |
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實施日期 |
2024年10月03日 |
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歸口單位 |
中國食品藥品企業(yè)質量安全促進會 |
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主要起草單位 |
國家藥品監(jiān)督管理局疫苗及生物制品質量監(jiān)測與評價重點實驗室、湖南遠泰生物技術有限公司、和元生物技術（上海）股份有限公司、江蘇金斯瑞蓬勃生物科技有限公司、廣州吉賽生物科技股份有限公司、南京諾唯贊生物科技股份有限公司、南京金斯瑞生物科技有限公司、榮燦生物醫(yī)藥技術（上海）有限公司、傳信生物醫(yī)藥（蘇州）有限公司、湖南普瑞瑪藥物研究中心有限公司、寧波熙寧檢測技術有限公司、北京民海生物科技有限公司、蘇州駕玉生物醫(yī)藥有限公司、北京啟辰生生物科技有限公司、長沙晨辰醫(yī)藥科技有限公司、廣東科藝普實驗室設備研制有限公司、國家藥品監(jiān)督管理局藥物警戒技術研究與評價重點實驗室、武漢大學、海南醫(yī)科大學、中國科學院上海高等研究院、貝克曼庫爾特國際貿易（上海）有限公司、上海愛博才思分析儀器貿易有限公司、湖南光琇高新生命科技有限公司（人類干細胞國家工程研究中心）、蘇州科銳邁德生物醫(yī)藥科技有限公司、蘇州艾特森制藥設備有限公司、北京國衛(wèi)生物科技有限公司、武漢瀚海新酶生物科技有限公司、深圳市億錦航環(huán)境科技有限公司、廣東省醫(yī)學實驗動物中心、天津市第二人民醫(yī)院、廣州醫(yī)科大學附屬婦女兒童醫(yī)療中心、濟南市第四人民醫(yī)院、智聯(lián)灣實驗室科技（廣州）有限公司 |
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主要起草人 |
陸家海、向雙林、郭城、呂京、吳力軍、葉宇翔、李樂、周文婷、賈國棟、潘曉、王媛、閔天奇、陳康明、章雪晴、彭薇、姜德建、朱國振、李克雷、林巧（Claudia Lin）、于紅艷、劉國柱、莫仁春、李星、張榮光、胡漢昆、李娜、侯風青、陳泓序、程臘梅、左熾健、葉玉林、岳云強、楊廣宇、沈祥營、王剛、馬萍、胡丹丹、張磊升、廖聰慧、吳攸、王思雨、任倩、由慶睿、陸鈺、劉鵬、金秋恒、孫振、唐茂萍、尹思遠、劉學武、李佳、王海欣、何榮贊（Ron He）、辛琪、郝春霖、劉子琪、梁文娟、李怡雯、于蘭、高鐵、林戈、朱佳鳳、童家勇、王田恩、李梁、劉云勝、嚴家榮、韓英、藍曼馥、周芳、熊孟玲、韋厚良、黨金玲、盧圣東、張尚峰、周倩、劉羽霄、陳起靜、詹明高、耿玉杰、王慶輝、黃麗、曹其來、崔力沙、屠潔（Sky Tu）、郭小凱、熊學武、鄧崇威、宋攀奇、侯麗芳、徐玲麗、王文濤、張曉霞、胡建敏、楊嘉麗、史建輝、陳傍柱、柏清玉、熊梓辰、伍生軍、吳珊珊、劉珍秀、陳奕鈞、李思蓉、孫金鑫 |
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主要技術內容 |
本文件提供了使用基于mRNA-LNP技術開發(fā)（細胞）免疫治療產品的基本原則、組織和人員、設施設備及物料、產品開發(fā)的技術路線與工藝研究及其相應的質量控制與功能驗證、管理等基本原則和指導建議。 本文件適用于科研機構、生產企業(yè)基于mRNA-LNP技術開發(fā)CAR-T或CAR-NK細胞等免疫治療產品。 |
備注：標準購買信息：目前該團體標準文本還未對外公布，解讀參考了征求意見稿部分內容。
參考文獻
[1] www.ttbz.org.cn等
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